發(fā)布時(shí)間： 2020-04-13 點(diǎn)擊次數(shù)： 2750次
內(nèi)切酶一般從微生物中獲取，限制性核酸內(nèi)切酶的作用實(shí)際就是限制酶降解外源DNA，維護(hù)宿主遺傳穩(wěn)定的保護(hù)機(jī)制。自身DNA沒有被分解的原因是通過自身DNA甲基化，甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護(hù)，即讓它們?cè)诩谆D(zhuǎn)移酶的作用下，與甲基發(fā)生共價(jià)結(jié)合。通過甲基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的。
限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別序列的結(jié)構(gòu)情況：
根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu)，輔因子的需求切位與作用方式，可將限制酶分為三種類型，分別是第①型（Type I）、第②型（TypeⅡ）及第③型（TypeⅢ）。
Type I：
同時(shí)具有修飾及識(shí)別切割的作用；另有識(shí)別DNA上特定堿基序列的能力，通常其切割位距離識(shí)別位可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)。
TypeⅡ：
Ⅱ類中的限制性內(nèi)切酶在分子克隆中得到了廣泛應(yīng)用，它們是重組DNA的基礎(chǔ)。
只具有識(shí)別切割的作用，修飾作用由其他酶進(jìn)行。所識(shí)別的位置多為短的回文序列；所剪切的堿基序列通常即為所識(shí)別的序列。是遺傳工程上，實(shí)用性較高的限制酶種類。
Ⅱ類酶切割位點(diǎn)在識(shí)別序列中，有的在對(duì)稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的DNA片段；有的切割位點(diǎn)在對(duì)稱軸一側(cè)，產(chǎn)生帶有單鏈突出末端的DNA片段稱粘性末端，如EcoRⅠ切割識(shí)別序列后產(chǎn)生兩個(gè)互補(bǔ)的粘性末端。
TypeⅢ：
與一型限制酶類似，同時(shí)具有修飾及識(shí)別切割的作用。可識(shí)別短的不對(duì)稱序列，切割位與識(shí)別序列約距24-26個(gè)堿基對(duì)。
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